Barwienie dendrytów neuronalnych i kolców dendrytycznych metodą Golgiego-Coxa za pomocą zestawu FD Rapid GolgiStain

Metoda Golgiego-Coxa jest jedną z najskuteczniejszych technik badania morfologii dendrytów neuronalnych i kolców dendrytycznych. Jednak niezawodność i czasochłonny proces barwienia Golgiego-Coxa były głównymi przeszkodami w powszechnym stosowaniu tej techniki.

Aby przezwyciężyć te niedociągnięcia i promować tę nieocenioną technikę, opracowaliśmy  zestaw FD  Rapid  GolgiStain Kit  oparty na zasadzie metod opisanych przez Ramóna-Molinera w 1970 r. oraz Glasera i Van der Loosa w 1981 r.  Zestaw  znacznie poprawia i upraszcza Golgi- Technika Coxa.

Ten  zestaw jest niezawodny do wizualizacji szczegółów morfologicznych neuronów, umożliwiając analizę różnych parametrów morfologii dendrytycznej, takich jak długość i wzór rozgałęzień dendrytycznych oraz liczba, kształt i rozmiar kolców dendrytycznych, zarówno w mózgach zwierząt, jak i po śmierci człowieka. Dostępny jest 40-minutowy film instruktażowy dotyczący zamrażania tkanek, kriosekcji i barwienia.

Opracowanie zoptymalizowanego protokołu dla metody mikroskopii elektronowej Golgiego w oparciu o procedurę barwienia Golgiego-Coxa przy użyciu komercyjnego  zestawu .

  • Wprowadzenie zestawu  FD  Rapid  GolgiStain  Kit umożliwiło wielu badaczom łatwe badanie morfologii neuronów.
  • Dzięki ulepszonej metodzie impregnacji Golgi-Cox, przy użyciu tego  zestawu można uzyskać zarówno stabilne, jak i bardzo czułe barwione obrazy neuronów .
  • Aby szczegółowo przeanalizować mikrostruktury, takie jak kolce dendrytyczne i stożki wzrostu, staraliśmy się stworzyć użyteczną metodę łączącą barwienie Golgiego-Coxa i mikroskopię elektronową (metoda Golgiego-EM), tak aby przygotowane  próbki barwione Kit były odpowiednie do zastosowania w mikroskopii elektronowej (EM) badania.
  • Wyniki niniejszego badania sugerują znaczenie etapu wiązania aldehydem glutarowym w metodzie Golgiego-EM.
  • Tutaj przedstawiamy zalecany protokół dla metody Golgiego-EM, który jest dostępny dla ultrawysokonapięciowej mikroskopii elektronowej i transmisyjnej mikroskopii elektronowej.
  • Jesteśmy przekonani, że nasza metoda Golgiego-EM może stać się niezawodną i ważną metodą, która może przyczynić się do nowych odkryć w morfologii neuronów.

Spójne i powtarzalne barwienie gleju zmodyfikowaną metodą Golgiego-Coxa.

Barwienie Golgiego-Coxa jest potężnym podejściem histochemicznym, szeroko stosowanym do wizualizacji morfologii neuronów i gleju.

Jednak jego użycie jako metody pierwszego wyboru jest utrudnione ze względu na jej niepewny charakter, zmniejszoną konsystencję i długi czas barwienia. Zestaw  FD  Rapid  GolgiStain Kit  ( FD  Neurotechnologies, Inc., USA) został opracowany przy użyciu podejścia Golgi-Cox. Jest to prosty, niezawodny i powtarzalny sposób wykonywania impregnacji aparatem Golgiego do analizy morfologii neuronów.
Podajemy tutaj proste modyfikacje protokołu producenta, które umożliwiają powtarzalne i niezawodne barwienie komórek glejowych.
Ekspozycja tkanki mózgowej na 4% paraformaldehyd (PFA) podczas perfuzji, a następnie utrwalenie 8% aldehydem glutarowym w 4% PFA prowadziło do wybarwiania tylko komórek glejowych, podczas gdy przy braku utrwalania zarówno neurony, jak i glej wybarwiały się z niejasną morfologią. Dodatkowo stwierdziliśmy, że impregnacja w temperaturze 26°C±1 miała kluczowe znaczenie dla uzyskania jednolitego zabarwienia.
Nasze zmodyfikowane podejście Golgiego-Coxa jest spójne i powtarzalne oraz zapewnia jednolite barwienie gleju w całym mózgu.
Ponieważ ten protokół barwi tylko niewielki procent komórek, nadaje się do analizy pojedynczych komórek.

Ilościowe badanie Golgiego nad morfologią dendrytyczną w średnich neuronach kolczastych prążkowia myszy.

  • W tym badaniu przedstawiliśmy szczegółową ilościową analizę morfologiczną średnich neuronów kolczastych (MSN) w prążkowiu grzbietowym myszy i określiliśmy zgodność wartości pomiędzy trzema grupami zwierząt uzyskanych w różnych zestawach eksperymentów. Drzewa dendrytyczne 162 aparatów Golgi Cox ( zestaw FD  Rapid  GolgiStain  Kit ) impregnowanych MSN od 15 dorosłych myszy C57BL/6 zrekonstruowano trójwymiarowo za pomocą oprogramowania Neurolucida, a parametry morfologii dendrytycznej porównano między grupami doświadczalnymi.
  • Parametry długości i wzoru rozgałęzień nie wykazywały statystycznie istotnej różnicy i były wysoce spójne między grupami. Średnia powierzchnia neuronalnej somy wynosiła od 160 μm2 do 180 μm2, a komórki miały 5-6 pierwotnych dendrytów z blisko 40 segmentami na neuron. Analiza Sholla potwierdziła regularność rozgałęzień dendrytycznych.
  • Całkowita długość dendrytów wynosiła około 2100 µm, przy średniej długości poszczególnych odgałęzień (pośrednich) około 22 µm, a końcowej około 100 µm.
  •  Mimo że każda grupa eksperymentalna przeszła ten sam, ściśle określony protokół w zakresie preparacji tkanek i barwienia aparatu Golgiego, stwierdziliśmy niespójność objętości dendrytów i powierzchni somy.
  • Na te zmiany można było wpłynąć metodologicznie podczas procedury Golgiego, chociaż bez wpływu na długość dendrytów i złożoność drzewa.
  • Ponieważ aktywność neuronalna wpływa na grubość dendrytów, nie można było wykluczyć, że obserwowana niespójność objętości była związana ze stanami funkcjonalnymi neuronów przed uśmierceniem zwierząt.
  • Dostarczone tutaj kompleksowe analizy złożoności drzew i długości dendrytów mogą posłużyć jako dodatkowe narzędzie do zrozumienia zmienności morfologicznej w najliczniejszej populacji neuronów prążkowia.
  • Jako wartości odniesienia mogą stanowić podstawę do porównań z wynikami uzyskanymi w badaniach, w których do wyjaśniania różnych stanów patologicznych, w których występują MSN, wykorzystuje się różne modele genetycznie zmodyfikowanych myszy.
Zmodyfikowana i bardzo czuła metoda Golgiego-Coxa umożliwiająca całkowitą i stabilną impregnację neuronów embrionalnych.
Zestaw  FD  Rapid  GolgiStain  Kit  ( FD  NeuroTechnologies, Inc., Ellicott City, MD) został opracowany przy użyciu ulepszonej metody impregnacji Golgi-Cox w celu zapewnienia stabilnego, czułego i wygodnego barwienia dojrzałych neuronów. Za pomocą tej metody nie można jednak wyraźnie zwizualizować neuronów embrionalnych. Jeszcze bardziej ulepszyliśmy metodę Golgiego-Coxa, wprowadzając dodatkowy etap wiązania aldehydem przed impregnacją; w ten sposób możemy stabilnie i wystarczająco zapłodnić neurony mózgu płodu, tak że widoczne są nawet delikatne gałęzie drzew dendrytycznych.

Pomiar za pomocą sondy fluorescencyjnej wewnątrzlizosomalnego pH w żywych komórkach oraz zaburzenia pH przez różne czynniki.

  1. Opisano metodę ilościową pomiaru wewnątrzlizosomalnego pH w żywych komórkach. Dekstran znakowany izotiocyjanianem fluoresceiny ( FD ) jest endocytowany i akumulowany w lizosomach, gdzie pozostaje bez widocznej degradacji. Widmo fluorescencyjne tego związku zmienia się wraz z pH w zakresie 4-7 i nie ma na nie poważnego wpływu  stężenie FD  , siła jonowa lub stężenie białka.
  2. Żywe komórki na szkiełkach nakrywkowych są umieszczane w celce spektrofluorometrycznej i mogą być perfundowane różnymi pożywkami. Normalne pH wewnątrz lizosomów makrofagów wydaje się wynosić 4,7-4,8, chociaż może przejściowo spaść nawet do 4,5.
  3. Ekspozycja komórek na różne słabe zasady i kwaśne jonofory potasu powoduje wzrost pH.

 

FD Rapid GolgiStain™ Kit (large)

PK401 FD Neurotechnologies kit 979.2 EUR

FD Rapid GolgiStain Kit™ (small)

PK401A FD Neurotechnologies kit 751.2 EUR

FD Rapid GolgiStain™ kit - Solution C

PK401-C FD Neurotechnologies 250 ml 235.2 EUR

FD Rapid TimmStain™ Kit

PK701 FD Neurotechnologies kit 866.4 EUR

FD Rapid MultiStain™ Kit

PK501 FD Neurotechnologies kit 721.2 EUR

FD Apop™ Kit

PK101 FD Neurotechnologies kit 854.4 EUR

FD NeuroApap™ Kit

PK201 FD Neurotechnologies kit 987.6 EUR

Control Sections for FD NeuroSilver™ Kit

PCS101 FD Neurotechnologies each 69.6 EUR

FD NeuroSilver™ Kit II (for 300 sections)

PK301 FD Neurotechnologies kit 950.4 EUR

FD NeuroSilver™ Kit II (for 150 sections)

PK301A FD Neurotechnologies kit 789.6 EUR

Control sections for FD NeuroApop™ Kit (frozen)

PCS102- FD Neurotechnologies each 87.6 EUR

Control sections for FD NeuroApop™ Kit (frozen)

PCS102-2 FD Neurotechnologies each 80.54 EUR

Control sections for FD NeuroApop™ Kit (paraffin)

PCS102-1 FD Neurotechnologies each 80.44 EUR

FD Section Storage Solution™

PC101 FD Neurotechnologies 250 ml 157.2 EUR

FD Tissue Cryoprotection Solution™

PC102 FD Neurotechnologies 250 ml 156 EUR

FD Tissue Storage Solution™

PC103 FD Neurotechnologies 250 ml 177.6 EUR

FD Congo Red Solution™

PS108 FD Neurotechnologies 500 ml 284.4 EUR

FD Thionin Solution™ (regular strength)

PS101-1 FD Neurotechnologies 500 ml 206.4 EUR

FD Thionin Solution™ (double strength)

PS101-2 FD Neurotechnologies 500 ml 219.6 EUR

FD Hematoxylin Solution™ (regular strength)

PS104-1 FD Neurotechnologies 500 ml 240 EUR

FD Hematoxylin Solution™ (double strength)

PS104-2 FD Neurotechnologies 500 ml 310.8 EUR

FD Luxol Fast Blue Solution™

PS109 FD Neurotechnologies 500 ml 298.8 EUR

FD Cresyl Violet Solution™ (regular strength)

PS102-1 FD Neurotechnologies 500 ml 223.2 EUR

FD Cresyl Violet Solution™ (double strength)

PS102-2 FD Neurotechnologies 500 ml 278.4 EUR

FD Eosin Y Solution™ (regular strength)

PS103-1 FD Neurotechnologies 500 ml 182.4 EUR

FD Eosin Y Solution™ (double strength)

PS103-2 FD Neurotechnologies 500 ml 232.8 EUR

FD Methyl Green Solution™ (regular strength)

PS105-1 FD Neurotechnologies 500 ml 216 EUR

FD Methyl Green Solution™ (double strength)

PS105-2 FD Neurotechnologies 500 ml 270 EUR

FD Neutral Red Solution™ (regular strength)

PS106-1 FD Neurotechnologies 500 ml 219.6 EUR

FD Neutral Red Solution™ (double strength)

PS106-2 FD Neurotechnologies 500 ml 273.6 EUR

FD Azure II Solution™ (regular strength)

PS107-1 FD Neurotechnologies 500 ml Ask for price

FD Azure II Solution™ (double strength)

PS107-2 FD Neurotechnologies 500 ml Ask for price

Aflatoxin Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092054-50tests Abbexa 50 tests 477.6 EUR

Salbutamol Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092043-50tests Abbexa 50 tests 410.4 EUR

Quinolones Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092046-50tests Abbexa 50 tests 644.4 EUR

Clenbuterol Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092040-50tests Abbexa 50 tests 326.4 EUR

Ractopamine Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092042-50tests Abbexa 50 tests 360 EUR

Zearalenone Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092051-50tests Abbexa 50 tests 493.2 EUR

Zearalenone Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092056-50tests Abbexa 50 tests 510 EUR

Rapid RCA Assay Kit

VPK-111 Cell Biolabs 30 assays 644.4 EUR

Rapid RCA Assay Kit

VPK-111-5 Cell Biolabs 5 x 30 assays 2586 EUR

Sulfonamides Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092047-50tests Abbexa 50 tests 661.2 EUR

Tetracycline Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092048-50tests Abbexa 50 tests 560.4 EUR

Deoxynivalenol Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092052-50tests Abbexa 50 tests 560.4 EUR

Deoxynivalenol Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092053-50tests Abbexa 50 tests 560.4 EUR

Rtg Rapid Analysis Kit

27950201 Scientific Laboratory Supplies EACH 1317.6 EUR

Fish Protein Rapid Kit

ALG1008 Scientific Laboratory Supplies EACH 469.2 EUR

Gold Seal Rite-On® frosted slides

PO104 FD Neurotechnologies box (72 slides) 108 EUR

Chloramphenicol Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092045-50tests Abbexa 50 tests 427.2 EUR

Melamine Rapid Test Kit

abx092011-50tests Abbexa 50 tests 444 EUR

Aflatoxin B1 Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092055-50tests Abbexa 50 tests 477.6 EUR

Aflatoxin B1 Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092050-50tests Abbexa 50 tests 444 EUR

Malachite Green Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092041-10tests Abbexa 10 tests 360 EUR

Rapid Antibody Purification Kit

AKR-160 Cell Biolabs 10 assays 622.8 EUR

H. Pylori Rapid Stain Kit

AYH-1 ScyTek Laboratories 1 kit(s) 258 EUR

H. Pylori Rapid Stain Kit

AYH-2 ScyTek Laboratories 100 Slides 158.4 EUR

Canine T4 Rapid ELISA Kit

DEIA1763 Creative Diagnostics 32T 998.4 EUR

Section incubation carrier kit for 6 wells

PO304 FD Neurotechnologies each 127.2 EUR

Section incubation carrier kit for 12 wells

PO305 FD Neurotechnologies each 127.2 EUR

Phenylethanolamine A Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092044-50tests Abbexa 50 tests 560.4 EUR

Melamine (MEL) Rapid Test Kit

abx092057-50tests Abbexa 50 tests 444 EUR

Furaltadone Metabolite Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092035-50tests Abbexa 50 tests 644.4 EUR

Quinolones (QNs) Rapid Test Kit

abx092065-40tests Abbexa 40 tests 477.6 EUR

Salbutamol (SAL) Rapid Test Kit

abx092060-50tests Abbexa 50 tests 292.8 EUR

Quinolones (QNs) Rapid Test Kit

abx092067-40tests Abbexa 40 tests 477.6 EUR

Rapid Blood RNA Isolation Kit

BT4182 Bio Basic 10Preps 98.36 EUR

Rapid Blood RNA Isolation Kit

BT4183 Bio Basic 50Preps 197.03 EUR

Rapid Blood RNA Isolation Kit

BT4184 Bio Basic 250preps 608.1 EUR

Rapid Plant RNA Isolation Kit

PT4191 Bio Basic 50Preps 95.63 EUR

Furazolidone Metabolite Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092036-50tests Abbexa 50 tests 644.4 EUR

Clenbuterol (CLE) Rapid Test Kit

abx092058-50tests Abbexa 50 tests 292.8 EUR

Ractopamine (RAC) Rapid Test Kit

abx092059-50tests Abbexa 50 tests 292.8 EUR

Rapid Viral RNA Extraction Kit

VT4184 Bio Basic 50Preps 184.24 EUR

Nitrofurazone Metabolite Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092038-50tests Abbexa 50 tests 644.4 EUR

Tetracycline (TCs) Rapid Test Kit

abx092063-50tests Abbexa 50 tests 477.6 EUR

Sulfonamides (Sas) Rapid Test Kit

abx092064-40tests Abbexa 40 tests 477.6 EUR

Sterling Rapid Silver Stain Kit

NAT1106 Scientific Laboratory Supplies 1KIT 300 EUR

Rapid Fungal RNA Extraction Kit

FT71416 Bio Basic 50Preps 95.63 EUR

Brucella Antibody Rapid Test Kit

abx092069-40tests Abbexa 40 tests 427.2 EUR

Rapid Bacteria RNA Isolation Kit

BS8625 Bio Basic 50Preps 95.63 EUR

Kit Ral555 Rapid Modified Geimsa

CB361550 Scientific Laboratory Supplies EACH 127.95 EUR

Rabies Virus Antibodies Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092033-40tests Abbexa 40 tests 427.2 EUR

Ciprofloxacin (CPFX) Rapid Test Kit

abx092066-50tests Abbexa 50 tests 477.6 EUR

Procalcitonin rapid test (Colloidal Gold)

abx095264-80Units Abbexa 80 Units 1144.8 EUR

ToxOut? Rapid Endotoxin Removal Kit

K2501-5 Biovision each 314.4 EUR

Cobalt Rapid Run

6CoRR-100 ABTBeads 100 ml 517.2 EUR

Cobalt Rapid Run

6CoRR-25 ABTBeads 25 ml 199.2 EUR

Cobalt Rapid Run

6CoRR-500 ABTBeads 500 ml 1768.8 EUR

Nickel Rapid Run

6NiRR-100 ABTBeads 100 ml 517.2 EUR

Nickel Rapid Run

6NiRR-25 ABTBeads 25 ml 199.2 EUR

Nickel Rapid Run

6NiRR-500 ABTBeads 500 ml 1768.8 EUR

Aminohydantoin Hydrochloride Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092037-50tests Abbexa 50 tests 644.4 EUR

Rapid Gold Immuno-assay Kit for Antibody IgG to Tuberculosis (TB)

Z7010010 Biochain 1 kit 247 EUR

BASU RaPID plasmid

PVT14054 Lifescience Market 2 ug 718.8 EUR

Calci-Clear Rapid

NAT1318 Scientific Laboratory Supplies EACH 45.6 EUR

Calci-Clear Rapid

NAT1320 Scientific Laboratory Supplies EACH 140.4 EUR

Calci-Clear Rapid

NAT1322 Scientific Laboratory Supplies EACH 585.6 EUR

Canine Parvovirus Antibodies Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092032-40tests Abbexa 40 tests 427.2 EUR

YB Rapid Ligationkit

FYC003-100R Yeastern Biotech 1 vial Ask for price

Pseudorabies Virus Antibodies Rapid Test Kit (Colloidal gold)

abx092026-50tests Abbexa 50 tests 385.2 EUR

 

Zmiany pH są znacznie  szybsze  niż wewnątrzlizosomalna akumulacja słabych zasad. Inhibitory glikolizy (2-deoksyglukoza) i fosforylacji oksydacyjnej (cyjanek lub azydek) dodane razem, ale nie oddzielnie, powodują wzrost wewnątrzlizosomalnego pH. Wyniki te dostarczają dowodów na istnienie mechanizmu aktywnej akumulacji protonów w błonie lizosomalnej i potwierdzają teorię akumulacji słabych zasad w lizosomach przez pułapkowanie protonów.

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany. Wymagane pola są oznaczone *