Ostatnio wykazano, że mysie i ludzkie fibroblasty można przeprogramować do stanu przypominającego embrionalne komórki macierzyste przez wprowadzenie kombinacji czterech czynników transkrypcyjnych. Jednak potencjał terapeutyczny takich indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych (iPS) pozostał nieokreślony. Używając mysiego modelu humanizowanej anemii sierpowatokrwinkowej , pokazujemy, że myszy można uratować po przeszczepie krwiotwórczymi progenitorami uzyskanymi in vitro z autologicznych komórek iPS.
Udało się to osiągnąć po skorygowaniu allelu ludzkiej hemoglobiny sierpowej przez celowanie specyficzne dla genu. Nasze wyniki dostarczają dowodu na zastosowanie przeprogramowania indukowanego przez czynniki transkrypcyjne w połączeniu z terapią genową i komórkową w leczeniu chorób u myszy. Problemy związane z wykorzystaniem retrowirusów i onkogenów do przeprogramowania muszą zostać rozwiązane, zanim komórki iPS będą mogły być brane pod uwagę w leczeniu ludzi.
Normalne, genetycznie mozaikowe myszy, wytworzone ze złośliwych komórek potworniaka.
- Komórki złośliwego potworniaka myszy (lub raka embrionalnego) z prawidłową liczbą chromosomów modalnych pobrano z „rdzeń” ciał embrionalnych hodowanych wyłącznie in vivo jako guz wodobrzusza przez 8 lat i wstrzyknięto do blastocyst z wieloma markerami genetycznymi w celu zbadać zdolności rozwojowe, budowę genetyczną i odwracalność złośliwości komórek rdzenia.
- Uzyskano dziewięćdziesiąt trzy żywe, normalne zwierzęta przed i po urodzeniu. Spośród 14 dotychczas przeanalizowanych, trzy stanowiły komórkowe mozaiki genetyczne ze znacznym udziałem komórek pochodzących z guza w wielu tkankach niezwiązanych z rozwojem, w tym niektóre nigdy nie spotykane w guzach litych, które tworzą się u gospodarzy przeszczepu.
- Tkanki funkcjonowały normalnie i syntetyzowały swoje specyficzne produkty (np. immunoglobuliny, hemoglobinę dorosłych , białka wątroby) kodowane przez allele typu szczepu w znanych loci. Ponadto, na podstawie fenotypu sierści wykryto gen koloru związany z nowotworem, stal, o którym wcześniej nie wiedziano, że jest obecny w komórkach raka.
- Komórki pochodzące z raka, który ma budowę chromosomu płciowego X/Y, również przyczyniły się do powstania linii zarodkowej i utworzyły plemniki funkcjonalne, z których niektóre przeniosły gen stali na potomstwo. Tak więc, po prawie 200 pokoleniach przeszczepu jako wysoce złośliwy nowotwór, komórki rdzeniowe ciała zarodkowego wydają się być totipotentne w rozwoju i zdolne do ekspresji, w uporządkowanej kolejności w różnicowaniu tkanek somatycznych i zarodkowych, wielu genów dotychczas niemych w nowotworze pochodzenia .
- Ten eksperymentalny system „cyklingu” komórek rdzenia potworniaka przez myszy, w połączeniu z eksperymentalną mutagenezą tych komórek, może zatem zapewnić nowe i użyteczne narzędzie do biochemicznych, rozwojowych i genetycznych analiz różnicowania ssaków.
- Wyniki dostarczają również jednoznacznego przykładu u zwierząt niemutacyjnej podstawy transformacji w nowotwór złośliwy i powrotu do normalności. Pochodzenie tego nowotworu ze zdezorganizowanego zarodka sugeruje, że nowotwory złośliwe niektórych innych, bardziej wyspecjalizowanych komórek macierzystych mogą powstawać podobnie w wyniku dezorganizacji tkanek, prowadząc raczej do rozwojowych aberracji ekspresji genów niż do zmian w strukturze genów.
Dołączenie 40-parowej sekwencji bogatej w G + C (GC-clamp) do fragmentów genomowego DNA przez reakcję łańcuchową polimerazy skutkuje lepszym wykrywaniem zmian pojedynczych zasad.
- Elektroforeza w żelu z gradientem denaturującym (DGGE) może być wykorzystana do rozróżnienia dwóch cząsteczek DNA, które różnią się jedynie podstawieniem jednej zasady.
- Ta metoda wykrywa około 50% wszystkich możliwych zmian pojedynczych zasad we fragmentach DNA w zakresie od 50 do około 1000 par zasad.
- Aby zwiększyć liczbę zmian pojedynczych zasad, które można odróżnić DGGE, zastosowaliśmy reakcję łańcuchową polimerazy do przyłączenia sekwencji bogatej w 40 par zasad G + C, oznaczonej jako GC-clamp, do jednego końca amplifikowanych fragmentów DNA które obejmują regiony mysich i ludzkich genów beta-globiny.
- Pokazujemy, że ten zacisk GC umożliwia wykrycie mutacji, w tym mutacji sierpa hemoglobiny (HbS) i hemoglobiny C (HbC) w genie ludzkiej beta-globiny, które były wcześniej nie do odróżnienia przez DGGE.
- Oprócz zapewnienia łatwego sposobu dołączania zacisku GC do fragmentów genomowego DNA, technika reakcji łańcuchowej polimerazy znacznie zwiększa czułość DGGE. Dzięki temu podejściu fragmenty DNA pochodzące z mniej niż 5 ng ludzkiego genomowego DNA można wykryć przez barwienie żelu bromkiem etydyny, eliminując potrzebę stosowania sond radioaktywnych.
- Te ulepszenia rozszerzają zastosowanie DGGE do wykrywania polimorfizmów i mutacji w genomowym i sklonowanym DNA.
Tlenek azotu aktywuje enzymy cyklooksygenazy.
Oceniliśmy rolę tlenku azotu (NO) na aktywność konstytutywnej i indukowanej formy cyklooksygenazy (odpowiednio COX; COX-1 i COX-2). Indukcja syntazy NO (NOS) i COX (COX-2) w linii komórkowej makrofagów myszy RAW264.7 przez lipopolisacharyd Escherichia coli (1 mikrogram/ml, 18 h) spowodowała wzrost uwalniania azotynu (NO2-) i prostaglandyny E2 (PGE2), produkty odpowiednio NOS i COX. Produkcja zarówno NO2 jak i PGE2 była blokowana przez inhibitory NOS NG-monometylo-L-argininę lub aminoguanidynę.
Efekty NG-monometylo-L-argininy lub aminoguanidyny zostały odwrócone przez koinkubację z L-Arg, prekursorem syntezy NO, ale nie przez D-Arg. Komórki RAW264.7 stymulowane przez 18 godzin lipopolisacharydem w pożywce wolnej od L-Arg (w celu zmniejszenia wytwarzania NO przez endogenny szlak NOS) nie uwalniały NO2 i akumulowały co najmniej 4-krotnie mniej PGE2 w porównaniu z komórkami w obecności L-Arg. Wytwarzanie PGE2 wywołane 15-minutowym traktowaniem kwasem arachidonowym RAW264 indukowanego lipopolisacharydem. 7 komórek w pożywce z niedoborem L-Arg zmniejszyło się 3-krotnie w porównaniu z uwalnianiem uzyskanym z komórkami indukowanymi w pożywce zawierającej L-Arg.
W celu zbadania aktywacji NO indukowanej postaci COX pod nieobecność endogennego L-Arg, ludzkie płodowe fibroblasty stymulowano najpierw przez 18 godzin interleukiną 1 beta. Komórki te uwalniały PGE2, ale nie NO2, zgodnie z indukcją COX, ale nie NOS w fibroblastach.
Egzogenny NO jako roztwór gazowy lub uwalniany przez donor NO, nitroprusydek sodu lub triazotan glicerolu, zwiększał 5-krotnie aktywność COX w fibroblastach stymulowanych interleukiną 1 beta; efekty te zostały zniesione przez koinkubację z hemoglobiną (10 mikroM), która wiąże i dezaktywuje NO, ale nie błękitem metylenowym, inhibitorem rozpuszczalnej cyklazy guanylanowej.
Hemoglobin protein (Mouse) |
|||
30R-3102 | Fitzgerald | 100 mg | 159.6 EUR |
Hemoglobin protein (Mouse) |
|||
30-1135 | Fitzgerald | 5 mg | 630 EUR |
Purified Mouse Hemoglobin |
|||
HEMG17-N-1 | Alpha Diagnostics | 1 mg | 270 EUR |
Hemoglobin |
|||
E61I012 | EnoGene | 100ug | 411.6 EUR |
Mouse Hemoglobin (HB) Protein |
|||
20-abx168595 | Abbexa |
|
|
Mouse Hemoglobin ELISA Kit |
|||
E-90HM | Immunology Consultants Laboratory | 1 x 96 well plate | 529.2 EUR |
Mouse Hemoglobin Polyclonal Antibody |
|||
A57573-020 | EpiGentek | 20 ul | Ask for price |
Mouse Hemoglobin Polyclonal Antibody |
|||
A57573-050 | EpiGentek | 50 ul | Ask for price |
Mouse Hemoglobin Polyclonal Antibody |
|||
A57573-100 | EpiGentek | 100 ul | 423.5 EUR |
Mouse Hemoglobin Polyclonal Antibody |
|||
A57573 | EpiGentek |
|
|
Hemoglobin (Mouse) ELISA Kit |
|||
E4739-100 | Biovision | each | 744 EUR |
Mouse Hemoglobin (HB) ELISA Kit |
|||
20-abx154130 | Abbexa |
|
|
Mouse Hemoglobin Beta (HBb) Protein |
|||
20-abx067042 | Abbexa |
|
|
Mouse Hemoglobin (HB) CLIA Kit |
|||
abx197126-96tests | Abbexa | 96 tests | 990 EUR |
Mouse Hemoglobin (HB) ELISA Kit |
|||
abx254159-96tests | Abbexa | 96 tests | 764.4 EUR |
Mouse Hemoglobin (HB) CLIA Kit |
|||
20-abx492738 | Abbexa |
|
|
Mouse Hemoglobin subunit alpha (Hba) |
|||
1-CSB-EP010147MO | Cusabio |
|
|
Mouse hemoglobin (Hb) ELISA Kit |
|||
CSB-EQ027276MO-24T | Cusabio | 1 plate of 24 wells | 198 EUR |
Mouse hemoglobin (Hb) ELISA Kit |
|||
1-CSB-EQ027276MO | Cusabio |
|
|
Mouse Hemoglobin subunit alpha (Hba) |
|||
1-CSB-YP010147MO | Cusabio |
|
|
Mouse Hemoglobin, Mu ELISA kit |
|||
E03H0041-192T | BlueGene | 192 tests | 1524 EUR |
Mouse Hemoglobin, Mu ELISA kit |
|||
E03H0041-48 | BlueGene | 1 plate of 48 wells | 624 EUR |
Mouse Hemoglobin, Mu ELISA kit |
|||
E03H0041-96 | BlueGene | 1 plate of 96 wells | 822 EUR |
Mouse Hemoglobin H ELISA kit |
|||
E03H0227-192T | BlueGene | 192 tests | 1524 EUR |
Mouse Hemoglobin H ELISA kit |
|||
E03H0227-48 | BlueGene | 1 plate of 48 wells | 624 EUR |
Mouse Hemoglobin H ELISA kit |
|||
E03H0227-96 | BlueGene | 1 plate of 96 wells | 822 EUR |
Mouse Hemoglobin A ELISA kit |
|||
E03H0228-192T | BlueGene | 192 tests | 1524 EUR |
Mouse Hemoglobin A ELISA kit |
|||
E03H0228-48 | BlueGene | 1 plate of 48 wells | 624 EUR |
Mouse Hemoglobin A ELISA kit |
|||
E03H0228-96 | BlueGene | 1 plate of 96 wells | 822 EUR |
Mouse hemoglobin (Hb) ELISA kit |
|||
E03H1362-192T | BlueGene | 192 tests | 1524 EUR |
Mouse hemoglobin (Hb) ELISA kit |
|||
E03H1362-48 | BlueGene | 1 plate of 48 wells | 624 EUR |
Mouse hemoglobin (Hb) ELISA kit |
|||
E03H1362-96 | BlueGene | 1 plate of 96 wells | 822 EUR |
Hemoglobin (HB) Polyclonal Antibody (Mouse) |
|||
4-PAB409Mu01 | Cloud-Clone |
|
|
Hemoglobin ELISA Kit (Mouse) (OKIA00096) |
|||
OKIA00096 | Aviva Systems Biology | 96 Wells | 777.6 EUR |
Mouse Hemoglobin(HB)ELISA kit |
|||
GA-E0840MS-48T | GenAsia Biotech | 48T | 403.2 EUR |
Mouse Hemoglobin(HB)ELISA kit |
|||
GA-E0840MS-96T | GenAsia Biotech | 96T | 640.8 EUR |
Mouse Hemoglobin (HB) ELISA Kit |
|||
SEB409Mu-10x96wellstestplate | Cloud-Clone | 10x96-wells test plate | 3305.89 EUR |
Mouse Hemoglobin (HB) ELISA Kit |
|||
SEB409Mu-1x48wellstestplate | Cloud-Clone | 1x48-wells test plate | 377.42 EUR |
Mouse Hemoglobin (HB) ELISA Kit |
|||
SEB409Mu-1x96wellstestplate | Cloud-Clone | 1x96-wells test plate | 487.75 EUR |
Mouse Hemoglobin (HB) ELISA Kit |
|||
SEB409Mu-5x96wellstestplate | Cloud-Clone | 5x96-wells test plate | 1834.88 EUR |
Mouse Hemoglobin (HB) ELISA Kit |
|||
4-SEB409Mu | Cloud-Clone |
|
|
Mouse Hemoglobin(HB)ELISA kit |
|||
QY-E20731 | Qayee Biotechnology | 96T | 433.2 EUR |
Mouse Hemoglobin ELISA Kit (HB) |
|||
RK02880 | Abclonal | 96 Tests | 625.2 EUR |
Mouse Hemoglobin (HB)ELISA kit |
|||
YLA1089MO-48T | Shanghai YL Biotech | 48T | 465 EUR |
Mouse Hemoglobin (HB)ELISA kit |
|||
YLA1089MO-96T | Shanghai YL Biotech | 96T | 600 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
70C-CR8000GAP | Fitzgerald | 1 mg | 36 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
70-HG13 | Fitzgerald | 1 mg | 411.6 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
10-1396 | Fitzgerald | 1 mg | 217.2 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
10-1396s | Fitzgerald | 1 mg | 177.6 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
10-1397 | Fitzgerald | 1 mg | 217.2 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
10-1723 | Fitzgerald | 250 ug | 376.8 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
10-1725 | Fitzgerald | 250 ug | 376.8 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
10-3144 | Fitzgerald | 1 mg | 418.8 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
10-3145 | Fitzgerald | 1 mg | 418.8 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
10-H03B | Fitzgerald | 500 ug | 591.6 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
10-H03C | Fitzgerald | 1 mg | 277.2 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
10-H03D | Fitzgerald | 1 mg | 277.2 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
10-H03E | Fitzgerald | 1 mg | 277.2 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
10-H03G | Fitzgerald | 1 mg | 276 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
10-H03H | Fitzgerald | 1 mg | 276 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
10-H03I | Fitzgerald | 1 mg | 276 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
10R-8559 | Fitzgerald | 100 ul | 471.6 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
70R-15102 | Fitzgerald | 100 ug | 392.4 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
70R-15118 | Fitzgerald | 100 ug | 392.4 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
70R-15225 | Fitzgerald | 100 ug | 392.4 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
70R-15469 | Fitzgerald | 100 ug | 392.4 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
70R-15479 | Fitzgerald | 100 ug | 392.4 EUR |
Hemoglobin protein |
|||
30R-3084 | Fitzgerald | 100 mg | 159.6 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
10C-CR8000M1 | Fitzgerald | 1 mg | 439.2 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
10C-CR8000M2 | Fitzgerald | 1 mg | 418.8 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
10C-CR8000M3 | Fitzgerald | 1 mg | 184.8 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
10C-CR8000M4 | Fitzgerald | 1 mg | 184.8 EUR |
Hemoglobin protein |
|||
30-1134 | Fitzgerald | 1 gram | 214.8 EUR |
Hemoglobin Protein |
|||
abx061580-100ug | Abbexa | 100 ug | 760.8 EUR |
Cow Hemoglobin |
|||
20-abx082083 | Abbexa |
|
|
Hemoglobin Antibody |
|||
abx023968-1mg | Abbexa | 1 mg | 644.4 EUR |
Hemoglobin Antibody |
|||
abx023969-1mg | Abbexa | 1 mg | 644.4 EUR |
Hemoglobin antibody |
|||
70R-7580 | Fitzgerald | 1 mg | 406.8 EUR |
Hemoglobin Antibody |
|||
1-CSB-PA00790E0Gp | Cusabio |
|
|
Hemoglobin Antibody |
|||
1-CSB-PA00480E0Rb | Cusabio |
|
|
Hemoglobin Antibody |
|||
1-CSB-PA00490E0Rb | Cusabio |
|
|
Hemoglobin Antibody |
|||
1-CSB-PA00500E0Gp | Cusabio |
|
|
Hemoglobin Antibody |
|||
1-CSB-PA00240E0Rb | Cusabio |
|
|
HEMOGLOBIN POWDER |
|||
H08-103-10kg | Alphabiosciences | 10 kg | 2444.4 EUR |
HEMOGLOBIN POWDER |
|||
H08-103-2Kg | Alphabiosciences | 2 Kg | 536.4 EUR |
HEMOGLOBIN POWDER |
|||
H08-103-500g | Alphabiosciences | 500 g | 178.8 EUR |
anti-Hemoglobin |
|||
YF-PA23863 | Abfrontier | 50 ul | 400.8 EUR |
Mouse Glycated Hemoglobin (HbA1c) ELISA Kit |
|||
20-abx156705 | Abbexa |
|
|
Mouse Glycated Hemoglobin A1c (HbA1c) Protein |
|||
20-abx168596 | Abbexa |
|
|
Mouse Hemoglobin Alpha 1 (HBa1) Protein |
|||
20-abx167288 | Abbexa |
|
|
Mouse Glycated Hemoglobin (HbA1c) ELISA Kit |
|||
abx254828-96tests | Abbexa | 96 tests | 801.6 EUR |
Mouse Glycated Hemoglobin (HbA1c) CLIA Kit |
|||
20-abx490037 | Abbexa |
|
|
CLIA kit for Mouse HB (Hemoglobin) |
|||
E-CL-M0345 | Elabscience Biotech | 1 plate of 96 wells | 700.8 EUR |
Mouse Glycated hemoglobin A1c ELISA kit |
|||
E03G0322-192T | BlueGene | 192 tests | 1524 EUR |
Mouse Glycated hemoglobin A1c ELISA kit |
|||
E03G0322-48 | BlueGene | 1 plate of 48 wells | 624 EUR |
Mouse Glycated hemoglobin A1c ELISA kit |
|||
E03G0322-96 | BlueGene | 1 plate of 96 wells | 822 EUR |
Mouse Fetal Hemoglobin (HbF) ELISA kit |
|||
E03H0226-192T | BlueGene | 192 tests | 1524 EUR |
Mouse Fetal Hemoglobin (HbF) ELISA kit |
|||
E03H0226-48 | BlueGene | 1 plate of 48 wells | 624 EUR |
Mouse Fetal Hemoglobin (HbF) ELISA kit |
|||
E03H0226-96 | BlueGene | 1 plate of 96 wells | 822 EUR |
Hemoglobin (HB) Polyclonal Antibody (Mouse), APC |
|||
4-PAB409Mu01-APC | Cloud-Clone |
|
|
Ponadto, nitroprusydek sodu (0,25-1 mM) zwiększał stymulowane kwasem arachidonowym wytwarzanie PGE2 przez mysie zrekombinowane COX-1 i COX-2. Wyniki te pokazują, że NO wzmaga aktywność COX poprzez mechanizm niezależny od cGMP i sugerują, że w warunkach, w których obecne są zarówno układy NOS, jak i COX, następuje wzrost produkcji prozapalnych prostaglandyn, w którym pośredniczy NO, co może powodować zaostrzenie odpowiedź zapalna. Dane sugerują, że NO bezpośrednio oddziałuje z COX, powodując wzrost aktywności enzymatycznej